上海信帆生物提供Western Blot實驗代測服務(wù)

Western blot簡介    蛋白質(zhì)印記又稱印記，根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測樣品中的某種蛋白的方法。它是利用特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進行著色，通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達情況的信息。 Western blot的原理    Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。    以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。Western blot樣本要求客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品， 檢測目的蛋白的一抗（或由本公司代購）。樣品要求為： 1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。2、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。 Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖，實驗報告，包括整個試驗流程所涉及的實驗數(shù)據(jù)和實驗步驟。如需進行蛋白純化服務(wù)，將提供檢測報告Western blot實驗服務(wù)服務(wù)內(nèi)容我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測的全流程服務(wù)，如需要還可進行灰度分析。說明1、建議提供目的蛋白陽性表達樣品（純蛋白或有陽性表達的細(xì)胞或組織）作為陽性對照。2、每張膜檢測1-8個樣品。3、如果一抗由客戶提供，請在正確條件下保存，避免污染及反復(fù)凍融。

Western Blot實驗 免疫印跡實驗免疫反應(yīng)：

1. 用0.01M PBS洗膜，5min ×3次。

2. 加入包被液，平穩(wěn)搖動，室溫2hr。

3. 棄包被液，用0.01M PBS洗膜，5min×3次。

4. 加入一抗（按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋，液體必須覆蓋膜的全部），4℃ 放置12hr以上。陰性對照，以1%BSA取代一抗，其余步驟與實驗組相同。

5. 棄一抗和1%BSA，用0.01M PBS分別洗膜，5min×4次。

6. 加入辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗（按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋），平穩(wěn)搖動，室溫2hr。

7. 棄二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×4次。

8. 加入顯色液，避光顯色至出現(xiàn)條帶時放入雙蒸水中終止反應(yīng)。

四、Western Blot實驗 免疫印跡實驗注意事項

1、Western Blot實驗免疫印跡實驗一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋白要經(jīng)過預(yù)實驗確定*條件。

2、Western Blot實驗免疫印跡實驗顯色液必須新鮮配置使用，zui后加入H2O2。

3、Western Blot實驗免疫印跡實驗DAB有致癌的潛在可能，操作時要小心仔細(xì)。

 尊敬的客戶：本公司有放射技術(shù)服務(wù)、蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)、組化、PCR技術(shù)服務(wù)、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析等，如果您想了解Western blot的更多內(nèi)容或者其他服務(wù)信息，您可以咨詢上海信帆生物科技有限公司，了解更多產(chǎn)品的詳細(xì)信息，至善至美的服務(wù)是我們永無止境的追求，歡迎新老客戶放心選購自己心儀產(chǎn)品，我們將竭誠為您服務(wù)！

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