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細胞成活率形態(tài)學(xué)觀察法及檢測法

更新時間:2015-09-09      瀏覽次數(shù):1491
  • 細胞成活率形態(tài)學(xué)觀察法及檢測法:

    細胞成活率,判斷之形態(tài)學(xué)觀察法:

    細胞內(nèi)出現(xiàn)顆?;蚩张?。

    細胞內(nèi)如果出現(xiàn)顆粒物質(zhì),表明細胞處于非健康狀態(tài)。

    同樣,細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡也說明細胞處于非健康狀態(tài)。

     細胞喪失雙折射性:

    如果發(fā)生在單層細胞:一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征(相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環(huán)),則提示該細胞已經(jīng)死亡,即zui終干枯死亡。

    如果發(fā)生在懸浮細胞:正常懸浮細胞清晰透明,如胞內(nèi)出現(xiàn)顆?;蜃儨啙岜砻骷毎軗p,甚至死亡。

    怎樣去除死細胞?單層培養(yǎng)的細胞死亡后,一般會漂浮起來,因此不需要特殊處理。

    而懸浮細胞或原代培養(yǎng)細胞則要通過密度離心(如Ficoll梯度)方法收集死細胞。

    細胞成活率檢測實驗

    即刻檢測實驗——

    染料柜染實驗:原理——萘黑、臺盼藍以及很多其他染料均不能透過活細胞。概要——將細胞懸液與染料混勻,在低倍顯微鏡下檢查。材料包括無菌材料,即細胞;生長液;0.25%胰酶;PBSA.非滅菌材料即:血細胞計數(shù)板;生存力染料;巴斯德吸管;顯微鏡;手執(zhí)計數(shù)器。操作步驟:

    1、用胰蛋白酶消化或離心,重懸制備高深度的細胞懸液

    2、取一塊干凈的血細胞計數(shù)板,將蓋玻片固定在適當(dāng)位置上。

    3、將一<滴細胞懸液和一滴(臺盼藍)或四滴(萘黑)染料混勻/li>

    4、加至血細胞計數(shù)板的計數(shù)室中。

    5、靜置1~2min(但不要放置很久,否則活細胞會受到損傷而吸收染料)。

    6、將計數(shù)板置于顯微鏡下,用10倍物境找到計數(shù)網(wǎng)格。

    7、計數(shù)細胞總及著色細胞的數(shù)目。

    8、清洗血細胞計數(shù)板,放入盒內(nèi)。

    實驗分析-計算未著色細胞的百分數(shù),該數(shù)字即為本方法所得出的細胞生存力百分數(shù)。

    據(jù)統(tǒng)計,原代培養(yǎng)細胞成活率一般為50%~90%。細胞系一般為90%~100%存活。凍融細胞一般為50%~80%存

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