什么是細(xì)菌內(nèi)毒素？
細(xì)菌內(nèi)毒素（脂多糖，LPS）是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分。人們在研究革蘭氏陰性菌血癥和內(nèi)毒素血癥的過程中，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌內(nèi)毒素在其中起著關(guān)鍵的作用，內(nèi)毒素使機(jī)體免疫功能嚴(yán)重受損，進(jìn)一步的發(fā)展可能引發(fā)膿毒性休克，彌散性血管內(nèi)凝血，急性呼吸窘迫綜合癥，全身炎癥反應(yīng)綜合癥或致命性多器官功能衰竭。因此，內(nèi)毒素的去除對于人類疾病治療的注射型藥品、生物制品等都是必須的，尤其對于基因藥物、蛋白藥物、單抗克隆藥物、生物疫苗、小分子化學(xué)藥物等生物制品的下游純化處理來說就顯得非常重要。

細(xì)菌內(nèi)毒素具有很強(qiáng)的耐熱性和化學(xué)穩(wěn)定性，100℃以下無大變化，在120℃高溫下加熱4小時僅能破壞98%，要*滅活需在180℃高溫下，加熱2小時以上，這樣的方法進(jìn)行內(nèi)毒素去除有相當(dāng)難度。一般化學(xué)藥品不影響細(xì)菌內(nèi)毒素的活性，只有強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或強(qiáng)氧化劑可以破壞細(xì)菌內(nèi)毒素。

內(nèi)毒素檢測試劑盒細(xì)菌內(nèi)毒素去除的原理
因細(xì)菌內(nèi)毒素體積小，耐熱性及化學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng)，所以一般的過濾、加熱和化學(xué)方法不易去除或滅活內(nèi)毒素?，F(xiàn)比較常用的內(nèi)毒素去除方法多為超濾法或親和層析法。本試劑盒使用的是一類內(nèi)毒素去除樹脂，它以生物安全性*的內(nèi)毒素特異吸附物質(zhì)為配體，經(jīng)此親和樹脂純化，樣品終的內(nèi)毒素水平可低于0.1 EU/ml。而且經(jīng)過親和純化后沒有對人體有毒有害物質(zhì)殘余，適合抗體、疫苗等生物制品的內(nèi)毒素去除。

內(nèi)毒素檢測試劑盒內(nèi)毒素去除實(shí)驗操作
親和層析內(nèi)毒素去除的方法操作較簡單，具體操作如下：
樣品處理：樣品在上樣前建議離心或用0.22μm或0.45μm濾膜過濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。樣品PH好控制在7-8，是內(nèi)毒素結(jié)合至柱子上佳pH條件。樣品好控制適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度，減少非特異性吸附，如0.15-0.5M的NaCl。
活化樹脂：將預(yù)裝柱置于鐵架臺，垂直固定，去除預(yù)裝柱頂部的蓋子，打開流速控制器，使保護(hù)液在重力作用下流干，加入5ml再生緩沖液（預(yù)冷），調(diào)節(jié)流速控制器，保持流速在0.25ml/min（或者1滴/6s），待再生緩沖液流干，再加入5ml再生緩沖液（預(yù)冷），再重復(fù)操作兩次，確保體系保持無熱原存在。即使是次使用也必須進(jìn)行這一步操作。這步操作大約需要60分鐘完成。

平衡樹脂：活化完畢，加入6ml平衡緩沖液（預(yù)冷），沿柱管內(nèi)壁均勻加入其中，保證清洗柱管的內(nèi)壁，調(diào)節(jié)流速控制器，保持流速在0.5ml/min（或者1滴/3s），流干平衡緩沖液，再按此操作重復(fù)兩次。這步操作大約需要40分鐘完成。

內(nèi)毒素去除：2ml樣品加到平衡后的層析柱中，調(diào)節(jié)流速在0.25ml/min（或者1滴/6s），不接收流出液。當(dāng)樣品流完，繼續(xù)添加樣品，樣品可以加滿柱管，同時收集流出液，即為除熱原的樣品。為了降低樣品的損失，樣品流完后，再添加2ml平衡液，并與之前的流出液合并。檢測樣品濃度及內(nèi)毒素水平。

再次使用：如果流出樣品內(nèi)毒素水平未能達(dá)到預(yù)期值，需要將預(yù)裝柱按照步驟2、3重新再生、平衡，然后上樣純化。

保存條件：如果預(yù)裝柱用完后需要保存，先用10ml平衡緩沖液（預(yù)冷）平衡柱子，待平衡液流干，加入10ml 20%乙醇溶液并于4℃保存。

內(nèi)毒素檢測試劑盒內(nèi)毒素去除親和填料的注意事項：
1、內(nèi)毒素去除用的親和填料每次使用前都需用再生液和平衡液處理；
2、實(shí)驗過程中使用的相關(guān)溶液和器具均要除熱原，防止引入內(nèi)毒素污染；
3、適當(dāng)延長填料與樣品溶液的處理時間可以加大內(nèi)毒素的吸附量；
4、樣品如果本身是帶負(fù)性電荷，為增加樣品回收率，樣品中可以加0.2M NaCl；
5、樣品pH在7-8范圍內(nèi)，可以提高內(nèi)毒素去除效率同時減少非特異性吸附；
6、樣品內(nèi)毒素如果一次去除不*，可以重復(fù)，直到合格為止；
7、親和填料保存條件為20%乙醇，4~8℃。