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講解熒光定量PCR檢測試劑盒實驗方法

更新時間:2017-12-12      瀏覽次數(shù):1078
  講解熒光定量PCR檢測試劑盒實驗方法
  熒光定量PCR檢測試劑盒實驗方法:
  1.取增菌液1ml加到1.5ml無菌離心管中,10,pm離心5min,棄去上清;加入50ul DNA提取液,充分混勻后沸水浴5 min,
  13,pm離心5min,取上清液進行檢測或保存于-20℃以待檢測。
  2.將PCR反應液置室溫平衡,融化后取Taq酶,按管加入Taq酶,即每個測試反應體系配制為:PCR反應液22.5ul+0.4ul
  Taq酶。
  3.加入模板:將保存在-20℃的核酸提取物置室溫解凍,以13,pm離心5min。陰、陽性對照使用前置室溫解凍。在每個
  PCR反應管中分別加入步驟1中處理過的模板或陰、陽性對照各2ul,蓋好管蓋,置于PCR儀上,記錄相應樣品號。
  4.上機擴增、檢測區(qū):反應條件為95℃:3min,1個循環(huán);95℃:5sec,60℃:40sec(信號采集),40個循環(huán)。反應體系設(shè)為25ul。對于多通道熒光PCR儀,信號采集時設(shè)定為Fam熒光素。
  試劑盒中含有沙門氏菌特異的引物,當樣品中含有沙門氏菌時,前增菌后提取的沙門氏菌DNA通過PCR成指數(shù)擴增,在反應過程中沙門氏菌特異的熒光探針跟靶核酸雜交,同時被Taq酶水解,把探針上的熒光基團和淬滅基團分開,從而通過熒光增量來實時判斷沙門氏菌的存在。
  試劑盒的保存條件及有效期
1.本試劑盒于-20℃保存。2.有效期為6個月。 
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