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RT-PCR實(shí)驗(yàn)代測(cè),RT-PCR技術(shù)服務(wù)

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  • 更新時(shí)間:2024-10-21
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詳細(xì)介紹

所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等

RT-PCR實(shí)驗(yàn)代測(cè),RT-PCR技術(shù)服務(wù)

上海信帆生物提供Q-PCR,RT-PCR,miRNA,mRNA實(shí)驗(yàn)服務(wù)!

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提供商:上海信帆生物科技有限公司

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RT-PCR簡(jiǎn)介:

RT-PCR稱為反轉(zhuǎn)錄PCR,實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
 

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù),PCR實(shí)驗(yàn)代測(cè),RT-PCR代測(cè)實(shí)驗(yàn)流程

1.實(shí)驗(yàn)用品準(zhǔn)備;

2.樣本總RNA提??;

3.RNA濃度檢測(cè);

4.反轉(zhuǎn)錄;

5.數(shù)據(jù)分析及結(jié)論。

客戶方提供:

細(xì)胞、組織、血液或cDNA樣本。

提供結(jié)果:

圖片,分析結(jié)果及實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

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很多同學(xué)能將 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR區(qū)分開?信帆生物帶你區(qū)分區(qū)分,撥開那扇PCR 迷霧:

其實(shí) Rea-ltime-PCR和 qPCR(Quantitative Rea-ltime-PCR )是一碼事,都是實(shí)時(shí)定量PCR,指的是PCR過(guò)程中每個(gè)循環(huán)都有數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)記錄,因此可以對(duì)起始模板數(shù)量進(jìn)行精確的分析。

雖然Real-time PCR(實(shí)時(shí)熒光定量PCR)和 Reverse transcription PCR(反轉(zhuǎn)錄PCR)看起來(lái)都可以縮寫為RT-PCR,但是,上的約定俗成的是:RT-PCR特指反轉(zhuǎn)錄PCR,而Real-time PCR一般縮寫為 qPCR(quantitative real-time PCR)

real-time RT-PCR中間的“RT”是 reverse transcription(逆轉(zhuǎn)錄),整個(gè)意思就是利用 mRNA 或 總RNA 為模板的實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)(quantitative Real-time RT-PCR)。real time RT-PCR指的是 qPCR+RT-PCR的組合,是說(shuō)將mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后再作為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR分析,因?yàn)镽T-PCR是可以定性的,但不能進(jìn)行定量檢測(cè)的。

所以不難理解 real-time RT-PCR(RT-qPCR) 就是結(jié)合了熒光定量技術(shù)的反轉(zhuǎn)錄PCR:先從 RNA 反轉(zhuǎn)錄得到 cDNA(RT),然后再用 Real-time PCR進(jìn)行定量分析(qPCR)。

所以,實(shí)時(shí)熒光定量PCR,它不僅可以用cDNA作為模板,也可以用基因組DNA等作為模板。
 

QPCR至少有以下特點(diǎn):

所用儀器少,只用一臺(tái)儀器。

檢測(cè)時(shí)間短,只須45分鐘~1小時(shí)10分鐘(試劑各異),而定性PCR須3~4小時(shí),酶免終點(diǎn)定量須6~8小時(shí),熒光終點(diǎn)定量須2~3小時(shí)。

操作極其簡(jiǎn)單:前處理后,樣本插入儀器一小時(shí)后到電腦上來(lái)出報(bào)告即可,無(wú)須開蓋,移樣本(以前方法),避免污染。

結(jié)果精確:定性PCR只能定性,很粗略,終點(diǎn)定量PCR由于只能在40個(gè)熱循環(huán)結(jié)束后檢測(cè)熒光,被測(cè)熒光達(dá)到飽和導(dǎo)致定量不夠精確,屬于半定量狀態(tài)。而實(shí)時(shí)熒光QPCR是在擴(kuò)增的每時(shí)每刻連續(xù)檢測(cè)各樣本的熒光值的變化。

檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍:10~10000000000 DNA copies/ml

檢測(cè)精度:0.1RLU

辨別率:5000和10,000個(gè)模板拷貝樣本的辨別率99.7%。

尊敬的客戶:
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